BPIFC基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建
摘要: 目的 構(gòu)建帶有FLAG標(biāo)簽的BPIFC基因真核表達(dá)載體,建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染BPIFC基因的HaCaT細(xì)胞系。方法 設(shè)計(jì)引物通過(guò)PCR擴(kuò)增出BPIFC基因片段,利用DNA重組技術(shù)將該基因片段定向插入pcDNA3.1-flag-N真核表達(dá)載體中,并對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切及DNA測(cè)序鑒定。驗(yàn)證正確的重組質(zhì)粒通過(guò)PI Max線性轉(zhuǎn)染的方法轉(zhuǎn)染至HaCaT細(xì)胞,通過(guò)G418篩選建立BPIFC穩(wěn)定... ...
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