亨廷頓病的基因診斷

摘要： 為了簡單高效檢測HD基因開放閱讀框5'端(CAG)n三核苷酸重復(fù)序列,建立快速準(zhǔn)確的亨廷頓病(Hun-tington disease,HD)基因診斷方法,應(yīng)用TaKaRa LATaqDNA聚合酶配合GC buffer擴(kuò)增HD基因包含(CAG)n重復(fù)序列的目的片段,非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測后回收(CAG)n拷貝數(shù)異常增多的目的片段,再次PCR擴(kuò)增后將產(chǎn)物連接至T載體,進(jìn)行DNA測序確定CAG的拷貝數(shù)。應(yīng)用該方法對一個(gè)HD家系的3名成員以及20名正常人進(jìn)行基因診斷,結(jié)果顯示該HD家系3名成員的一條染色體上的(CAG)n拷貝數(shù)在正常范圍內(nèi),而另一條染色體上的(CAG)n拷貝數(shù)異常增多,分別為39、40、41,而20例正常人(CAG)n拷貝數(shù)均在正常范圍內(nèi),正常和HD等位基因之間的(CAG)n拷貝數(shù)不相重疊。因此,應(yīng)用該方法可以對HD進(jìn)行準(zhǔn)確的基因診斷,結(jié)果同時(shí)也證明HD基因的動(dòng)態(tài)突變是導(dǎo)致中國人亨廷頓病的遺傳基礎(chǔ)。 ... （共4頁）