大籽蒿花粉過敏原的分離、鑒定與純化
摘要: 目的:對(duì)我國(guó)蒿屬花粉中常見的大籽蒿花粉進(jìn)行分離、鑒定與純化。方法:提取大籽蒿花粉粗浸液,通過聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離蛋白質(zhì)組分,并用凝膠成像系統(tǒng)測(cè)定各組分的相對(duì)分子質(zhì)量(Mr);免疫印跡(Western blot)鑒定花粉主要過敏原;通過DEAE-Cellulose DE-52離子交換層析(Ion exchange chromatography,IEC)對(duì)大籽蒿花粉過敏原進(jìn)行純化和免疫印跡鑒定。結(jié)果:分離后得到20多種蛋白組分,其中分子量(Mr)為62、57、38、29、25、14 kD 6個(gè)條帶蛋白含量最豐富,其中Mr為62 kD和16 kD的蛋白條帶與確診的蒿屬花粉過敏患者血清特異性IgE結(jié)合率最高(均>50%),為其主要過敏原,離子交換層析純化后可得到Mr為62、16 kD的過敏原。結(jié)論:大籽蒿花粉的主要過敏原為Mr 62 kD和16 kD的蛋白組分,離子交換層析技術(shù)可以對(duì)Mr為62 kD、16 kD的主要過敏原成分進(jìn)行純化。 ...
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