胰島素通過Akt/FoxO/SVV信號(hào)通路抑制缺血再灌注損傷誘導(dǎo)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用研究

摘要： 目的探討胰島素(INS)在抑制缺血再灌注損傷(IRI)誘導(dǎo)的心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞(CMECs)凋亡中的作用及其分子機(jī)制。方法分離和培養(yǎng)大鼠CMECs,建立模擬缺血再灌注(SI/R)模型,分別選用INS、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)特異性抑制劑渥曼青霉素(Wort)和FoxO1/3a干擾RNA處理細(xì)胞。采用隨機(jī)數(shù)字表法對(duì)大鼠CMECs進(jìn)行分組:SI/R組(5只大鼠的CMECs),SI/R+INS組(5只大鼠的CMECs),SI/R+INS+Wort組(5只大鼠的CMECs),SI/R+INS+FoxO1siRNA組(6只大鼠的CMECs),SI/R+INS+FoxO3asiRNA組(4只大鼠的CMECs)。采用末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)檢測各組CMECs凋亡率,ELISA法檢測各組Caspase-3活性,Westernblotting法檢測各組p-Akt(Ser473)、p-FoxO1(Ser256)、p-FoxO3a(Thr32)、生存素(SVV)蛋白表達(dá)水平。結(jié)果與SI/R組比較,SI/R+INS組、SI/R+INS+FoxO1siRNA組、SI/R+INS+FoxO3asiRNA組CMECs凋亡率及Caspase-3活性均降低(P<0.01);而SI/R+INS+Wort組CMECs凋亡率及Caspase-3活性與SI/R組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與SI/R+INS組比較,SI/R+INS+FoxO1siRNA組、SI/R+INS+FoxO3asiRNA組CMECs凋亡率及Caspase-3活性升高(P<0.01);且SI/R+INS+FoxO1siRNA組CMECs凋亡率高于SI/R+INS+FoxO3asiRNA組(P<0.01)。Westernblotting檢測結(jié)果顯示:SI/R+INS組p-Akt、p-FoxO1、p-FoxO3a、SVV蛋白表達(dá)水平均高于SI/R、SI/R+INS+Wort組、SI/R+INS+FoxO1siRNA組以及SI/R+INS+FoxO3asiRNA組(P<0.01);且SI/R+INS+FoxO3asiRNA組SVV蛋白表達(dá)水平低于SI/R+INS+FoxO1siRNA組(P<0.01)。結(jié)論NIS可顯著抑制IRI誘導(dǎo)的CMECs凋亡,其機(jī)制可能與激活A(yù)kt/FoxO/SVV信號(hào)通路相關(guān),且主要通過FoxO3a的激活上調(diào)SVV蛋白表達(dá)水平,從而抑制CMECs凋亡。 ... （共6頁）