透骨消痛膠囊對毒胡蘿卜素誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(PEKR信號通路)介導(dǎo)的大鼠體外培養(yǎng)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡的影響

摘要： 目的:觀察透骨消痛膠囊對毒胡蘿卜素(thapsigargin,TG)誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(PEKR信號通路)介導(dǎo)的大鼠體外培養(yǎng)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡的影響。方法:采用4周齡SD大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨建立軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)體系,將培養(yǎng)的第3代軟骨細(xì)胞分為空白組、模型組及透骨消痛膠囊高、中、低劑量組。空白組不進(jìn)行干預(yù);模型組及透骨消痛膠囊高、中、低劑量組先以2μmol·L~(-1)TG干預(yù)4h,然后模型組更換為正常培養(yǎng)基,透骨消痛膠囊高、中、低劑量組分別更換為濃度為100μg·mL~(-1)、50μg·mL~(-1)、25μg·mL~(-1)的含透骨消痛膠囊培養(yǎng)基干預(yù)24h。干預(yù)后以MTT法檢測各組軟骨細(xì)胞活性、以AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測各組軟骨細(xì)胞凋亡率、以WesternBlot法檢測各組軟骨細(xì)胞中激活轉(zhuǎn)錄因子4(activatingtranscriptionfactor4,ATF4)、結(jié)合免疫球蛋白(bindingimmunoglobulinprotein,BIP)、天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶12(cysteineaspartatespecificprotease12,Caspase12)和Caspase3的表達(dá)量。結(jié)果:(1)軟骨細(xì)胞活性。5組軟骨細(xì)胞吸光度比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(0.428±0.009,0.226±0.028,0.345±0.025,0.301±0.035,0.269±0.033,F=39.462,P=0.000)。模型組吸光度低于空白組(P=0.000);透骨消痛膠囊高、中、低劑量組吸光度均高于模型組(P=0.000,P=0.000,P=0.022);透骨消痛膠囊中、低劑量組的吸光度均低于高劑量組(P=0.019,P=0.000);透骨消痛膠囊低劑量組與中劑量組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.085)。(2)軟骨細(xì)胞凋亡率。5組軟骨細(xì)胞凋亡率比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義[(3.270±0.231)%,(30.003±4.128)%,(12.383±0.933)%,(15.387±2.961)%,(20.143±3.472)%,F=37.560,P=0.000]。模型組軟骨細(xì)胞凋亡率高于空白組(P=0.000);透骨消痛膠囊高、中、低劑量組軟骨細(xì)胞凋亡率均低于模型組(P=0.000,P=0.000,P=0.001);透骨消痛膠囊低劑量組軟骨細(xì)胞凋亡率低于高劑量組(P=0.007),透骨消痛膠囊高、低劑量組與中劑量組比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.216,P=0.063)。(3)軟骨細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(PEKR信號通路)關(guān)鍵蛋白含量。5組軟骨細(xì)胞中ATF4含量比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(0.257±0.028,0.435±0.033,0.315±0.023,0.276±0.038,0.351±0.043,F=13.057,P=0.001)。空白組及透骨消痛膠囊高、中、低劑量組的ATF4含量均低于模型組(P=0.000,P=0.001,P=0.000,P=0.012);透骨消痛膠囊低劑量組的ATF4含量高于中劑量組(P=0.022);透骨消痛膠囊高劑量組的ATF4含量與透骨消痛膠囊中、低劑量組比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.188,P=0.229)。5組軟骨細(xì)胞中BIP含量比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(0.227±0.026,0.432±0.022,0.294±0.035,0.263±0.020,0.339±0.032,F=25.416,P=0.000)。空白組及透骨消痛膠囊高、中、低劑量組的BIP含量均低于模型組(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.002);透骨消痛膠囊低劑量組的BIP含量高于中劑量組(P=0.006);透骨消痛膠囊高劑量組的BIP含量與透骨消痛膠囊中、低劑量組比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.185,P=0.072)。5組軟骨細(xì)胞中Caspase12含量比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(0.252±0.027,0.346±0.028,0.294±0.011,0.315±0.024,0.325±0.019,F=7.345,P=0.005)。模型組的Caspase12含量高于空白組(P=0.001);透骨消痛膠囊高劑量組的Caspase12含量低于模型組(P=0.018);透骨消痛膠囊中、低劑量組的Caspase12含量與模型組比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.126,P=0.277);透骨消痛膠囊中、低劑量組的Caspase12含量與高劑量組比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.277,P=0.126);透骨消痛膠囊中、低劑量組的Caspase12含量比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.614)。5組軟骨細(xì)胞中Caspase3含量比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(0.265±0.028,0.380±0.017,0.317±0.026,0.304±0.019,0.333±0.022,F=10.507,P=0.001)。模型組的Caspase3含量高于空白組(P=0.000);透骨消痛膠囊高、中、低劑量組的Caspase3含量均低于模型組(P=0.006,P=0.002,P=0.029);透骨消痛膠囊中、低劑量組的Caspase3含量與高劑量組比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.496,P=0.387),透骨消痛膠囊中、低劑量組的Caspase3含量比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.138)。結(jié)論:透骨消痛膠囊能抑制TG誘導(dǎo)的大鼠體外培養(yǎng)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞發(fā)生由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(PEKR信號通路)介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,其作用效果與藥物劑量無明顯關(guān)系。 ... （共7頁）