PCR法檢測(cè)糞便樣本溶組織內(nèi)阿米巴的初步研究

摘要： 目的建立直接檢測(cè)糞便樣本中溶組織內(nèi)阿米巴的PCR方法。方法根據(jù)溶組織內(nèi)阿米巴標(biāo)準(zhǔn)株基因組中小亞基核糖體RNA (small subunit ribosome RNA, SSU rRNA)序列合成4對(duì)特異性引物(2對(duì)自主設(shè)計(jì)引物和2對(duì)參考引物),建立PCR檢測(cè)方法,用該方法對(duì)221例臨床腹瀉患者糞便標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),同時(shí)采用病原學(xué)碘染涂片鏡檢法和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)檢測(cè)抗原,對(duì)3種方法的陽性率進(jìn)行比較,并采用Kappa檢驗(yàn)進(jìn)行一致性分析,分析3種檢測(cè)方法結(jié)果的準(zhǔn)確性。結(jié)果 4對(duì)引物均擴(kuò)增出溶組織內(nèi)阿米巴特異的目的片段,建立了糞便樣本溶組織內(nèi)阿米巴檢測(cè)的PCR法。選擇其中2對(duì)引物(1對(duì)自主設(shè)計(jì)引物和1對(duì)參考引物)對(duì)221例糞便樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增,同時(shí)用碘染涂片鏡檢法查病原體,用ELISA法進(jìn)行抗原檢測(cè),3種方法溶組織內(nèi)阿米巴陽性檢出率分別為2.26%、0.90%和9.50%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ~2=23.34,P<0.01)。PCR法與碘染涂片鏡檢法比較,Kappa值為0.216,一致性微弱; PCR法與ELISA法比較一致性差,Kappa值為-0.134。PCR法的結(jié)果與臨床診斷的一致性最好。結(jié)論本研究通過自行設(shè)計(jì)引物建立的糞便樣本溶組織內(nèi)阿米巴PCR檢測(cè)法在準(zhǔn)確性上優(yōu)于鏡檢法和ELISA抗原檢測(cè)法,為該方法用于臨床診斷提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 ... （共6頁）