沙地云杉ISSR-PCR反應(yīng)體系的初步優(yōu)化

摘要： 以沙地云杉葉基因組DNA為材料,采用單因素試驗(yàn)方法對(duì)ISSR-PCR體系中的主要成分Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物濃度、退火溫度進(jìn)行篩選,建立并優(yōu)化沙地ISSR-PCR反應(yīng)體系。結(jié)果表明,UBC835是最適引物,適宜退火溫度為50℃。沙地云杉ISSR-PCR分析的最適反應(yīng)體系(20μL PCR反應(yīng)體系)為:2.0 mmol/L Mg2+、1.0 U/μL Taq DNA聚合酶、0.25 mmol/L dNTPs、0.25μmol/L引物、50 ng/μL模板DNA。PCR擴(kuò)增程序:94℃預(yù)變性4 min;94℃變性45 s,50℃退火45 s,72℃延伸2 min,40個(gè)循環(huán);72℃延伸7 min,4℃保存。 （共3頁(yè)）